病毒基因組 DNA/RNA 快速提取試劑盒公司正在出售的產品：豬（萊蕪）腹部脂肪干細胞（永生化） 20號染色體開放閱讀框165封閉多肽 腺病毒通用PCR檢測試劑盒 大鼠降鈣素(CT)ELISA試劑盒 3磷酸甘油酸激酶(PGK)酶活性比色法檢測試劑盒 玉蜀黍長蠕孢 卷曲螺旋結構域蛋白148抗體
更新時間：2024-01-12
商品屬性：
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
病毒基因組 DNA/RNA 快速提取試劑盒 | 50 次 | A-Hc2009 |
PCR基本步驟及注意事項？
一、實驗原理
PCR是體外人工選擇性擴增DNA的一種方法，它類似于生物體內DNA的復制。在生物體內DNA復制需要模板、引物、DNA聚合酶、DNA解旋酶、 dNTPs；而體外PCR反應同樣需要類似的成分，有模板、引物、PCR Buffer、Taq酶、dNTPs。其中引物是人工設計的特定序列，實現對特定位置的擴增；PCR Buffer提供一個反應的緩沖環境；反應過程同生物體內一樣，DNA雙鏈打開，引物結合模板，延伸形成新鏈。而這些過程在生物體內靠DNA解旋酶解鏈，而在體外在通過控制反應溫度實現的。如常用94℃變性模板DNA打開雙鏈，在退火溫度處引物結合到模板上，最后在72℃完成延伸，并反復重復此過程即可實現對特定片段DNA的大量擴增。到第三循環開始才產生出和靶DNA區段相同的DNA分子，進一步循環地產生出靶DNA區段的指數加倍。
在擴增后期,由于產物積累,使原來呈指數擴增的反應變成平坦的曲線,產物不再隨循環數而明顯上升,這稱為平臺效應。平臺期(Plateau)會使原先由于錯配而產生的低濃度非特異性產物繼續大量擴增，達到較高水平。因此，應適當調節循環次數，在平臺期前結束反應， 減少非特異性產物。到達平臺期(Plateau)所需循環次數取決于樣品中模板的拷貝。
二、主要的成分
1.模板可以是多種形式，主要包括基因組DNA、質粒DNA、攜帶病毒的基因組DNA、PCR產物，cDNA等，但不能為RNA。對于不同類型的模板，其主要不同在于預變性的時間以及模板的量。一般對于大的基因組DNA預變性時間10min足夠，質粒DNA2min、攜帶病毒的基因組DNA預變性2min、PCR產物預變性2min即可。
注意cDNA為單鏈DNA，但仍可做PCR的模板，只不過在第一輪循環時只有一個引物結合，合成另一條鏈。從第二輪開始，兩個引物均與特異位點結合，從而實現了與常規PCR的接軌。而同作為單鏈的RNA卻不能進行PCR擴增，原因就在于實現PCR反應的是DNA聚合酶，只能特意識別DNA鏈。
2.對于模版的量來說，一般25ul體系DNA的質量為50—100ng。對于基因組DNA由于其結構比較復雜，提取的濃度也往往比較大，為防止濃度過大對PCR造成影響，故需對提取的DNA進行梯度稀釋。否則濃度過高則可能會引起非特異性擴增。對于質粒及PCR產物由于其結構簡單，且提取濃度一般較低，則無需稀釋。
PCR實驗中應該注意的問題有哪些?
沒有ct值
檢測結果遇到沒有Ct值情況,排查是否有以下問題:
1、循環數不夠(一般不超過45循環,不僅背景值提高,定量也不準);
2、PCR程序設置錯誤,檢測熒光信號的步驟有誤。一般SG法采用72℃延伸時采集,TaqMan法則一般在退火結束時或延伸時采集信號,另外熒光采集是否選中;
3、引物或探針降解。可通過PAGE電泳檢測引物和探針是否降解;
4、模板量可能降解或上樣量不足(不超過500ng,根據試劑盒說明書即可), 對未知濃度的樣本應從系列稀釋樣本的最高濃度做起;如果發生模板降解,應考慮樣本準備中雜質的引入及反復凍融的情況,建議將模板樣本小量分裝儲備,避免反復凍融;
5、引物探針是否合適(尤其是引物跨越內含子,以確保擴增基因組DNA;上下游引物Tm值超過4℃以上也會影響擴增)。
ct值過晚
在相對定量中, Ct值一般控制在15—25之間比較好,如果在絕對定量中, 對低拷貝數的樣品,Ct值會增大, 但是一般不宜超過40循環, 否則定量不準確。
因此,判斷Ct值出現過晚是否屬于非正常情況, 需要根據具體實驗設計和目的進行。
1、擴增效率低。引物之間或者引物和探針的比例不合適, 需要進行優化;引物或探針設計不合理, 需要重新設計;
2、PCR程序不合適, 改用三步法進行反應, 或者優化退火/延伸溫度, 可以適當降低退火溫度; 退火/延伸時間短(可以在推薦的時間條件下延長10s);
3、MgCl2濃度不合適,增加鎂離子濃度等。PCR各種反應成分的降解或加樣量的不足;
4、PCR產物太長。PCR產物設計超過500bp;
5、模板中存在抑制物。用高純度模板進行PCR檢測或將模板進行稀釋。
公司正在出售的產品：
豬葡萄球菌染料法熒光定量PCR試劑盒 | 二氫嘧啶酶樣3ELISA試劑盒 DPYSL3免費代測試劑 | 甲型流感）病毒H6亞型染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 |
冬瓜皮染料法PCR鑒定試劑盒 | 表面膜免疫球蛋白DELISA試劑盒 mIgD免費代測試劑 | 丁型肝炎病毒PCR檢測試劑盒直銷 |
山羊痘病毒PCR檢測試劑盒 | 補體成分1q子成分樣蛋白1ELISA試劑盒 | 難辨梭狀芽胞桿菌PCR檢測試劑盒 |
水痘帶狀皰疹病毒即人皰疹病毒型PCR檢測試劑盒 | 玻連蛋白/體外粘連蛋白ELISA試劑盒 | 奈瑟菌通用染料法熒光定量PCR試劑盒 |
利什曼原蟲通用染料法熒光定量PCR試劑盒 | 超磷酸化微管相關蛋白tauELISA試劑盒 | 洋蔥伯克氏菌探針法熒光定量PCR試劑盒 |
犬腺體病毒2型(犬傳染性喉氣管炎病毒）探針法熒光定量PCR試劑盒 | 刺猬酰基轉移酶ELISA試劑盒 | 乙型肝炎病毒核酸定量及YMDD變異聯合PCR測定試劑盒 |
饒氏無綠藻PCR檢測試劑盒 | 單純皰疹病毒Ⅰ型抗體ELISA試劑盒 | 牛傳染性胸膜肺炎染料法熒光定量PCR試劑盒 |
利什曼原蟲PCR檢測試劑盒 | 蛋白ATP1B4ELISA試劑盒 | 馬立克氏病病毒PCR檢測試劑盒供應 |
鯉皰疹病毒通用探針法熒光定量PCR試劑盒 | 蛋白酪磷酸酶受體NELISA試劑盒 | 泌尿道致病性大腸桿菌(UPEC)探針法熒光定量PCR試劑盒 |
犬流感病毒32型探針法熒光定量PCR試劑盒 | 動力蛋白激活蛋白1ELISA試劑盒 | 南極犬牙魚源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒 |
柯薩奇 A16 型核酸檢測試劑盒 | 人核因子κB抑制物激酶β(IKK-β)試劑盒ELISA | 牛分枝桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 |
病毒H5/H9亞型PCR檢測試劑盒（熒光PCR法） | 人基質金屬蛋白酶7(MMP-7)elisa試劑盒 | 禽腺病毒B型探針法熒光定量PCR試劑盒 |
鯉皰疹病毒3型探針法熒光定量PCR試劑盒 | 人鈣依賴性胞漿型磷脂酶A2(iPLA2)ELISA檢測試劑盒 | 同斑節對蝦桿狀病毒PCR檢測試劑盒 |
產氣克雷伯氏菌PCR檢測試劑盒 | 人L選擇素(L-Selectin/CD62L)試劑盒 ELISA | 病毒基因組 DNA/RNA 快速提取試劑盒光滑念珠菌探針法熒光定量PCR試劑盒 |
兔黏液瘤病毒PCR檢測試劑盒 | 人白介素31(IL-31)檢測試劑盒elisa | 牛分支桿菌卡介苗PCR檢測試劑盒 |
