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在(zai)做elisa試(shi)劑盒實驗的時候(hou),ELISA吸(xi)光(guang)(guang)值一直在(zai)衰(shuai)減(jian)這樣的現象(xiang)。在(zai)加完顯色(se)液(ye)(購買)顯色(se)一定時間后(hou)，再加終(zhong)止液(ye)（2M H2SO4，自己配制）后(hou)，立(li)即測(ce)試(shi)其吸(xi)光(guang)(guang)度(du)(du)值，等過幾分鐘再測(ce)試(shi)吸(xi)光(guang)(guang)度(du)(du)值，發(fa)(fa)現兩次(ci)測(ce)得的吸(xi)光(guang)(guang)度(du)(du)值發(fa)(fa)生衰(shuai)減(jian)。第(di)二次(ci)均小于次(ci)。并(bing)且(qie)，加終(zhong)止液(ye)時，從(cong)條(tiao)加到第(di)12條(tiao)后(hou)，測(ce)試(shi)發(fa)(fa)現，吸(xi)光(guang)(guang)度(du)(du)值從(cong)1-12條(tiao)逐級衰(shuai)減(jian)。前提(ti)是這12條(tiao)酶(mei)標板都(dou)是同一種產品，并(bing)且(qie)包被相同蛋白。原(yuan)來ELISA吸(xi)光(guang)(guang)度(du)(du)值衰(shuai)減(jian)可以這樣巧妙應對。
其實具體的原因也很簡單，有可能是顯(xian)色液(ye)的質(zhi)量不(bu)夠好(hao)。一般情況下，終(zhong)止(zhi)(zhi)反應后(hou)(hou)OD值的下降前期不(bu)是很明(ming)顯(xian)。終(zhong)止(zhi)(zhi)后(hou)(hou)，吸光度值是會隨著時間(jian)衰減(jian)，所以一般是加完終(zhong)止(zhi)(zhi)液(ye)后(hou)(hou)立即測(ce)，這樣比較準(zhun)。再次分析12條顯(xian)示逐(zhu)級遞(di)減(jian)的原因看(kan)看(kan)是否是：
1、 顯色時間調整(zheng)，如(ru)果(guo)你現在的顯色時間是10MIN，那調整(zheng)到30MIN，再加終止(zhi)液,觀察上述現象(xiang)是否出現。
2、 終(zhong)(zhong)(zhong)止液中加(jia)入少(shao)量(liang)甘油看下怎么樣。建議您使用(yong)RD品牌的(de)ELISA試劑盒，顯色時間是30分(fen)鐘(zhong)，終(zhong)(zhong)(zhong)止后(hou)(hou)(hou)要求(qiu)在30分(fen)鐘(zhong)內檢測，加(jia)入終(zhong)(zhong)(zhong)止液后(hou)(hou)(hou)，在加(jia)入終(zhong)(zhong)(zhong)止液后(hou)(hou)(hou)2到(dao)3分(fen)終(zhong)(zhong)(zhong)內檢測，這(zhe)是OD值相對比較高。擬合值能(neng)達到(dao)四個9。
