大(da)內皮素ELISA試劑盒(he)說明書 實驗原理(li): 本試(shi)劑盒應(ying)用雙抗體夾心法測(ce)定標本中血清素/血清胺(ST)水(shui)平。用(yong)純化的血清(qing)素(su)/血清胺(ST)抗(kang)體包被微孔板，制成固(gu)相抗(kang)體，往包被單抗(kang)的微孔中(zhong)依次(ci)加入血清素/血(xue)清胺(ST)，再與HRP標記的血清素/血清胺(ST)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體(ti)復合(he)物，經過徹di洗滌后(hou)加底物TMB顯色(se)。TMB在(zai)HRP酶S的(de)催化下轉化成藍(lan)色，并在酸的(de)作用下轉化成最終的(de)黃色。顏色的(de)深淺(qian)和樣品中的(de)血清素(su)/血清胺(ST)呈正相關。用酶(mei)標儀在450nm波長下測(ce)定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣(yang)品中血(xue)清素/血清胺(ST)濃度。 試(shi)劑(ji)盒組(zu)成 : 1、30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止(zhi)液 6ml×1瓶 2、酶標試(shi)劑 6ml×1瓶(ping) 8 標準(zhun)品(pin)（160pg/ml） 0.5ml×1瓶(ping) 3、酶標(biao)包(bao)被板 12孔×8條 9 標準(zhun)品(pin)稀釋液 1.5ml×1瓶 4、樣(yang)品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書(shu) 1份(fen) 5、顯色(se)劑A液(ye) 6ml×1瓶 11 封板膜 2張 6、顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密(mi)封(feng)袋(dai) 1個(ge) 標本要求: 1．標本(ben)采集后(hou)盡早(zao)進(jin)行(xing)(xing)提(ti)取(qu)，提(ti)取(qu)按相關文獻進(jin)行(xing)(xing)，提(ti)取(qu)后(hou)應盡快進(jin)行(xing)(xing)實(shi)驗。若不(bu)能馬上進(jin)行(xing)(xing)試(shi)驗，可將標本(ben)放于(yu)-20℃保存，但應避免反復凍融 2．不能檢測含NaN3的樣(yang)品(pin)，因NaN3抑制辣根過氧化(hua)物酶的（HRP）活性。 樣本處(chu)理及要求(qiu)： 1.血清：全血標本(ben)請于室溫放置2小(xiao)時或(huo)4℃過(guo)夜(ye)后于1000g離(li)心20分鐘(zhong)，取上清即可(ke)檢測，或(huo)將(jiang)標本(ben)放于-20℃或(huo)-80℃保存，但(dan)應避免(mian)反(fan)復凍融。 2.血漿：可用EDTA或(huo)肝素作(zuo)為抗凝(ning)劑，標本采集后30分(fen)鐘(zhong)內(nei)于2 - 8°C 1000g離心20分(fen)鐘(zhong)，或(huo)將標本放于-20℃或(huo)-80℃保(bao)存，但(dan)應避(bi)免反(fan)復凍融。 3.組織勻漿：用預(yu)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組(zu)(zu)織(zhi)，去除殘留血(xue)液（勻漿中裂(lie)解的(de)紅細胞會影(ying)響測(ce)量結果），稱(cheng)重后將組(zu)(zu)織(zhi)剪(jian)碎。將剪(jian)碎的(de)組(zu)(zu)織(zhi)與對應(ying)體積的(de)PBS（一般按1:9的(de)重量體積比，比如1g的(de)組(zu)(zu)織(zhi)樣品(pin)對應(ying)9mL的(de)PBS，具體體積可根據實驗(yan)需要適當調整，并(bing)做好(hao)記錄。推薦在PBS中加(jia)入(ru)(ru)蛋白酶抑制劑）加(jia)入(ru)(ru)玻璃勻漿器(qi)中，于冰上充分研磨。為了進一步裂(lie)解組(zu)(zu)織(zhi)細胞，可以(yi)對勻漿液進行超(chao)聲破(po)碎，或反復凍(dong)融。將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取(qu)上清檢測(ce)。 4. 細胞培(pei)養物上(shang)(shang)清或其(qi)它生物標(biao)本：1000g離(li)心20分鐘，取上(shang)(shang)清即可檢測，或將(jiang)標(biao)本放(fang)于-20℃或-80℃保(bao)存，但應避免反復(fu)凍融(rong)。 試劑盒性能： 1. 靈敏度(du)(du)：zui小(xiao)的檢測(ce)濃度(du)(du)小(xiao)于(yu)1號標準(zhun)品(pin)。稀釋度(du)(du)的線性(xing)。樣品(pin)線性(xing)回歸與預期(qi)濃度(du)(du)相關系數R值為0.990。 2. 特異(yi)性：不(bu)與其它細胞因(yin)子反應。 3. 重復性：板內(nei)、板間變異(yi)系數均小于10%。 保存條件及有效期:
1．試劑盒保存(cun)：；2-8℃。
2．有效期：6 個月。 試劑盒特點: 1、高效、靈(ling)敏、特異的抗體; 2、穩定的重復性(xing)和(he)可靠性(xing); 3、吸(xi)附性能好，空(kong)白值低，孔(kong)底透明(ming)度高的固相載體(ti); 4、適用血清、血漿、組(zu)織勻漿液(ye)、細胞培養上清液(ye)、尿液(ye)等(deng)(deng)等(deng)(deng)多種標本類型; 5、節省實(shi)驗(yan)經費。 操作步驟(zou)： 1.標(biao)(biao)準品(pin)(pin)的稀(xi)(xi)釋：本試劑盒提(ti)供(gong)原倍(bei)標(biao)(biao)準品(pin)(pin)一支，用戶可按(an)照下列圖表在(zai)小(xiao)試管中進行稀(xi)(xi)釋。 2.加(jia)樣(yang)(yang)：分別設空白(bai)孔(kong)(kong)（空白(bai)對(dui)照(zhao)孔(kong)(kong)不加(jia)樣(yang)(yang)品及酶標試劑，其余(yu)各(ge)步操(cao)作相同(tong)）、標準孔(kong)(kong)、待測(ce)(ce)樣(yang)(yang)品孔(kong)(kong)。在酶標包(bao)被板(ban)(ban)上標準品準確加(jia)樣(yang)(yang)50μl，待測(ce)(ce)樣(yang)(yang)品孔(kong)(kong)中先(xian)加(jia)樣(yang)(yang)品稀釋(shi)液(ye)40μl，然(ran)后再加(jia)待測(ce)(ce)樣(yang)(yang)品10μl（樣(yang)(yang)品最終稀釋(shi)度為(wei)5倍(bei)）。加(jia)樣(yang)(yang)將樣(yang)(yang)品加(jia)于酶標板(ban)(ban)孔(kong)(kong)底部(bu)，盡量不觸(chu)及孔(kong)(kong)壁(bi)，輕輕晃動混勻。 3.溫(wen)育(yu)：用封板膜封板后置37℃溫(wen)育(yu)30分鐘。 4.配(pei)液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用 5.洗滌(di)(di)：小心揭掉封(feng)板膜，棄去(qu)液體，甩干(gan)(gan)，每孔(kong)加滿洗滌(di)(di)液，靜置30秒后棄去(qu)，如此重復5次，拍干(gan)(gan)。 6.加酶：每孔加入酶標試(shi)劑50μl，空白孔除外。 7.溫育：操作同3。 8.洗滌：操作同(tong)5。 9.顯(xian)(xian)色(se)：每孔先(xian)加入顯(xian)(xian)色(se)劑A50μl，再加入顯(xian)(xian)色(se)劑B50μl，輕(qing)輕(qing)震蕩混(hun)勻，37℃避光顯(xian)(xian)色(se)10分鐘. 10.終(zhong)止(zhi)：每孔(kong)加終(zhong)止(zhi)液50μl，終(zhong)止(zhi)反(fan)應（此時藍色立轉(zhuan)黃(huang)色）。 11.測定(ding)：以空白孔調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(du)（OD值(zhi)）。 測定(ding)應(ying)在加終(zhong)止液后15分鐘以內進(jin)行(xing)。 計算： 以(yi)(yi)標準(zhun)物的(de)濃(nong)(nong)度為(wei)橫坐(zuo)標，OD值為(wei)縱坐(zuo)標，在坐(zuo)標紙上繪(hui)出標準(zhun)曲線(xian)(xian)，根據樣(yang)品(pin)的(de)OD值由標準(zhun)曲線(xian)(xian)查出相應的(de)濃(nong)(nong)度；再(zai)乘以(yi)(yi)稀(xi)釋倍數；或用標準(zhun)物的(de)濃(nong)(nong)度與OD值計算出標準(zhun)曲線(xian)(xian)的(de)直(zhi)線(xian)(xian)回歸方程式(shi)，將樣(yang)品(pin)的(de)OD值代入(ru)方程式(shi)，計算出樣(yang)品(pin)濃(nong)(nong)度，再(zai)乘以(yi)(yi)稀(xi)釋倍數，即為(wei)樣(yang)品(pin)的(de)實(shi)際濃(nong)(nong)度。 注意事項(xiang)： 1．試劑盒從冷藏(zang)環境中取出應在室溫平衡(heng)15-30分鐘后(hou)(hou)方可使(shi)用，酶(mei)標(biao)包被(bei)板開(kai)封(feng)后(hou)(hou)如未用完，板條應裝(zhuang)入密(mi)封(feng)袋中保存。 2．濃洗滌(di)(di)液(ye)可能(neng)會有結晶析出(chu)，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌(di)(di)時不影響結果(guo)。 3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對(dui)其(qi)準確性，以避免試驗誤(wu)差(cha)。一次加樣時間最(zui)好控(kong)制在(zai)5分鐘內，如標本數量(liang)多，推薦使用排槍加樣。 4．請每次(ci)測定的同時做標準曲線(xian)，最(zui)好做復孔。如標本中(zhong)待測物質含量過(guo)高(gao)（樣(yang)本OD值(zhi)(zhi)大于(yu)標準品孔第一(yi)孔的OD值(zhi)(zhi)），請先用樣(yang)品稀釋(shi)液稀釋(shi)一(yi)定倍(bei)(bei)(bei)數(shu)（n倍(bei)(bei)(bei)）后(hou)(hou)再測定，計算時請最(zui)后(hou)(hou)乘以總(zong)稀釋(shi)倍(bei)(bei)(bei)數(shu)（×n×5）。 5．封板膜(mo)只限一次(ci)性使用，以(yi)避(bi)免(mian)交叉污染。 6．底(di)物(wu)請避光保存。 7．嚴格(ge)按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標(biao)儀讀(du)數為(wei)準(zhun). 8．所(suo)有樣品，洗滌液(ye)和各種廢棄物(wu)(wu)都(dou)應按傳染物(wu)(wu)處理。 9．本試劑不同批號組(zu)分不得混用(yong)。
| 
