蛋(dan)白酪氨(an)酸(suan)激酶測定試劑盒(he)說明書 實驗原理: 本試劑(ji)盒應用雙抗體夾心法測定標本中(zhong)血清(qing)素/血清胺(an)(ST)水(shui)平。用純化的(de)血清素(su)/血(xue)清胺(ST)抗體(ti)包(bao)被微孔板(ban)，制成固相抗體(ti)，往包(bao)被單抗的微孔中(zhong)依次(ci)加入血清(qing)素(su)/血清胺(ST)，再與(yu)HRP標(biao)記的血清素/血清胺(ST)抗體結合(he)，形成抗體-抗原-酶標抗體復合(he)物，經過徹di洗滌后加底(di)物TMB顯色。TMB在(zai)HRP酶的催(cui)化下轉(zhuan)(zhuan)化成藍(lan)色(se)，并在酸的作用下轉(zhuan)(zhuan)化成最終的黃色(se)。顏色(se)的深淺和樣品中(zhong)的血(xue)清素/血清胺(ST)呈正相關(guan)。用酶標儀在450nm波長下測定(ding)吸光度（OD值），通過標準曲(qu)線計算樣品中血清素/血清胺(an)(ST)濃(nong)度(du)。 標本要求: 1．標本采集后盡早進(jin)行(xing)提取，提取按相關文獻進(jin)行(xing)，提取后應盡快進(jin)行(xing)實驗。若不能馬上進(jin)行(xing)試(shi)驗，可將標本放于-20℃保存，但(dan)應避免反(fan)復凍融 2．不能(neng)檢測含(han)NaN3的(de)樣品(pin)，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。 樣本處理及要求(qiu)： 1.血清：全(quan)血標本請于室溫放置2小(xiao)時或(huo)4℃過(guo)夜后于(yu)1000g離心20分鐘，取上清即可檢(jian)測，或(huo)將(jiang)標本放(fang)于-20℃或-80℃保存，但(dan)應(ying)避(bi)免反(fan)復(fu)凍融。 2.血(xue)漿：可(ke)用(yong)EDTA或肝素(su)作為抗凝劑(ji)，標本采集后30分鐘(zhong)內于2 - 8°C 1000g離(li)心(xin)20分鐘(zhong)，或將(jiang)標本放于-20℃或-80℃保存，但應避(bi)免(mian)反復凍融。 3.組織勻漿(jiang)：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖(chong)洗(xi)組織，去除殘留(liu)血(xue)液(ye)（勻漿中裂解的紅細(xi)胞會影響(xiang)測量(liang)結(jie)果(guo)），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重(zhong)量體(ti)積比，比如1g的組織樣(yang)品對應9mL的PBS，具(ju)體體積可根據實驗需要適當調整，并(bing)做好記錄(lu)。推薦(jian)在PBS中加(jia)入蛋白酶抑制劑）加(jia)入玻璃(li)勻漿(jiang)器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組(zu)織(zhi)細胞，可以對勻漿(jiang)液(ye)進行超聲破碎，或反復凍融。將勻漿(jiang)液(ye)于5000×g離心(xin)5~10分鐘，取上清檢測。 4.細胞培(pei)養物上清(qing)或其它生物標(biao)本：1000g離心20分鐘，取上(shang)清即可檢測，或將標本(ben)放于-20℃或-80℃保存，但應避免(mian)反復凍融。 試劑盒特點: 1、高效(xiao)、靈敏(min)、特異的(de)抗體; 2、穩定的重復性和可靠(kao)性; 3、吸附性能好，空白值低(di)，孔(kong)底透(tou)明度(du)高的固相載體(ti); 4、適用(yong)血(xue)清、血(xue)漿(jiang)、組織勻(yun)漿(jiang)液、細胞培(pei)養上清液、尿液等等多種標本(ben)類型(xing); 5、節省實(shi)驗經費。 試劑盒性能： 1. 靈(ling)敏(min)度：zui小(xiao)的檢測濃度小(xiao)于1號標準品(pin)。稀釋度的線性。樣(yang)品(pin)線性回歸與(yu)預期濃度相關系(xi)數(shu)R值為0.990。 2. 特異性：不與其它(ta)細胞因子(zi)反應。 3. 重復性(xing)：板內、板間(jian)變異系數均小于10%。 操作步驟： 1.標準品的稀(xi)釋(shi)：本試劑盒(he)提供原倍標準品一支，用戶可按(an)照下列圖表在小試管(guan)中(zhong)進行稀(xi)釋(shi)。  2.加(jia)樣(yang)：分別設空白孔(kong)（空白對照孔(kong)不加(jia)樣(yang)品(pin)及(ji)酶標(biao)試(shi)劑，其余(yu)各步(bu)操作相同）、標(biao)準(zhun)(zhun)孔(kong)、待測樣(yang)品(pin)孔(kong)。在酶標(biao)包被板上標(biao)準(zhun)(zhun)品(pin)準(zhun)(zhun)確加(jia)樣(yang)50μl，待測樣品孔(kong)中先(xian)加樣品稀釋(shi)液40μl，然后再加(jia)待(dai)測樣品10μl（樣品最終(zhong)稀釋度為5倍）。加樣將(jiang)樣品加于酶(mei)標板孔底部(bu)，盡量不觸及孔壁，輕輕晃(huang)動(dong)混勻。 3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫(wen)育30分鐘。 4.配液：將30倍濃縮洗滌液用(yong)蒸(zheng)餾水30倍稀釋后備(bei)用 5.洗滌(di)：小心揭掉封板(ban)膜，棄去液體(ti)，甩(shuai)干，每孔加滿洗滌(di)液，靜置(zhi)30秒(miao)后(hou)棄去，如此(ci)重(zhong)復5次，拍干。 6.加酶：每孔加入酶標(biao)試劑50μl，空白孔(kong)除外。 7.溫育：操作同(tong)3。 8.洗(xi)滌：操作(zuo)同5。 9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加(jia)入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混(hun)勻，37℃避光顯色10分(fen)鐘. 10.終(zhong)止(zhi)：每孔加終(zhong)止(zhi)液(ye)50μl，終止(zhi)反應（此(ci)時(shi)藍色(se)立(li)轉黃色(se)）。 11.測定：以空白孔調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止(zhi)液后(hou)15分鐘以(yi)內進行(xing)。 計(ji)算： 以標準物(wu)的濃度為橫坐(zuo)標，OD值(zhi)為縱坐標(biao)，在(zai)坐標(biao)紙上(shang)繪出標(biao)準曲線，根據(ju)樣品的OD值由標(biao)準曲線(xian)查出相應的濃度(du)；再(zai)乘以(yi)稀(xi)釋倍數(shu)；或用標(biao)準物的濃度(du)與OD值計算出(chu)標準曲線的直線回歸(gui)方程式，將(jiang)樣品(pin)的OD值(zhi)代入方(fang)程(cheng)式，計(ji)算出樣品(pin)濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品(pin)的實(shi)際(ji)濃度。 注意事項： 1．試劑盒從冷(leng)藏環境中取出應在室(shi)溫平衡15-30分鐘后方(fang)可使用，酶標包被板(ban)開封后如未用完，板(ban)條應裝(zhuang)入(ru)密(mi)封袋中保存。 2．濃洗滌(di)液(ye)可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌(di)時不影響(xiang)結果。 3．各(ge)步加(jia)樣均應使(shi)用加(jia)樣器，并經(jing)常校對其(qi)準(zhun)確性(xing)，以(yi)避免試驗誤差。一次加(jia)樣時間最好控制在(zai)5分鐘內，如標(biao)本數(shu)量多，推薦(jian)使用排槍加樣(yang)。 4．請(qing)每次測(ce)定的(de)同時(shi)做(zuo)標(biao)準(zhun)曲線，最好(hao)做(zuo)復孔。如標(biao)本中待(dai)測(ce)物質(zhi)含量過高（樣(yang)本OD值大于標(biao)準品孔(kong)(kong)第一孔(kong)(kong)的OD值），請先(xian)用(yong)樣品(pin)稀釋液(ye)稀釋一定倍數（n倍）后(hou)再測定，計算(suan)時請最后(hou)乘以總稀釋倍數（×n×5）。 5．封(feng)板(ban)膜只限(xian)一次性使用(yong)，以(yi)避(bi)免(mian)交(jiao)叉污(wu)染。 6．底物請(qing)避光保存。 7．嚴(yan)格按照說明(ming)書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準. 8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄(qi)物都應按傳染物處理。 9．本試劑不(bu)同批(pi)號組分(fen)不(bu)得(de)混(hun)用。 保存條件及有效期: 1．試劑盒保存：；2-8℃。 2．有效期(qi)：6 個月。
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