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電壓門控鉀通道酶聯免疫試劑盒說(shuo)明書

實驗原(yuan)理:

本(ben)試劑盒應用(yong)雙抗(kang)體夾心法(fa)測定標(biao)本(ben)中血清(qing)素/血清(qing)胺(ST)水平(ping)。用純化的血(xue)清素/血清胺(an)(ST)抗(kang)體包(bao)被微孔(kong)板，制成(cheng)固相抗(kang)體，往包(bao)被單抗(kang)的微孔(kong)中依次(ci)加入血清(qing)素/血清胺(ST)，再與HRP標記的血清素/血清胺(ST)抗(kang)體結合(he)，形成抗(kang)體-抗原-酶標(biao)抗體復合物，經過徹di洗滌后加底物TMB顯(xian)色。TMB在HRP酶S的(de)催化下轉化成藍色(se)，并(bing)在酸的(de)作用下轉化成最終的(de)黃色(se)。顏色(se)的(de)深淺和(he)樣品中的(de)血清(qing)素/血清(qing)胺(ST)呈正相關。用酶標儀(yi)在450nm波長下(xia)測定吸光度（OD值），通過(guo)標準(zhun)曲線計算樣品(pin)中(zhong)血清素/血清胺(an)(ST)濃(nong)度。

樣本處理及要(yao)求：
1.血清：全血標本請于室溫放置2小(xiao)時或4℃過夜后(hou)于1000g離心20分鐘(zhong)，取上清即可(ke)檢測，或將(jiang)標本放于-20℃或-80℃保存，但應避(bi)免反復凍(dong)融。
2.  血漿：可用EDTA或肝素(su)作為抗凝劑，標本(ben)采集后(hou)30分(fen)鐘內(nei)于2 - 8°C 1000g離心(xin)20分(fen)鐘，或將(jiang)標本(ben)放于-20℃或-80℃保存(cun)，但應避免反復凍融。
3.  組(zu)織勻(yun)(yun)漿：用預冷的(de)PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組(zu)織，去(qu)除殘留血液（勻(yun)(yun)漿中(zhong)裂解的(de)紅細(xi)胞(bao)(bao)會影響(xiang)測量結果），稱重后(hou)將(jiang)組(zu)織剪碎(sui)(sui)。將(jiang)剪碎(sui)(sui)的(de)組(zu)織與(yu)對(dui)應(ying)體(ti)積(ji)的(de)PBS（一(yi)般按(an)1:9的(de)重量體(ti)積(ji)比，比如1g的(de)組(zu)織樣品對(dui)應(ying)9mL的(de)PBS，具體(ti)體(ti)積(ji)可根據(ju)實驗(yan)需要適當調整，并(bing)做好記錄。推薦在(zai)PBS中(zhong)加入蛋白酶抑制(zhi)劑）加入玻(bo)璃勻(yun)(yun)漿器中(zhong)，于(yu)冰(bing)上(shang)充分(fen)研(yan)磨。為了(le)進(jin)一(yi)步裂解組(zu)織細(xi)胞(bao)(bao)，可以對(dui)勻(yun)(yun)漿液進(jin)行超(chao)聲(sheng)破碎(sui)(sui)，或反復凍融(rong)。將(jiang)勻(yun)(yun)漿液于(yu)5000×g離(li)心5~10分(fen)鐘，取上(shang)清(qing)檢測。
4.  細胞培養物上清(qing)或其它(ta)生物標本：1000g離心20分鐘，取(qu)上清(qing)即可檢測，或將標本放于-20℃或-80℃保存，但(dan)應避免反復(fu)凍(dong)融。

試劑盒特(te)點:

1、高效、靈敏、特異的抗(kang)體(ti);

2、穩(wen)定的(de)重復(fu)性和可靠性;

3、吸附性(xing)能好(hao)，空白值(zhi)低，孔底透(tou)明度高的(de)固相(xiang)載體;

4、適用(yong)血清、血漿、組(zu)織勻漿液、細胞培養上清液、尿(niao)液等等多(duo)種標本類型;

5、節省實驗(yan)經(jing)費。

操作步(bu)驟：

1. 標準品(pin)的稀(xi)釋：本(ben)試劑盒提供(gong)原倍標準品(pin)一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行(xing)稀(xi)釋。

2. 加樣：分別設空(kong)(kong)白孔(kong)（空(kong)(kong)白對照孔(kong)不加樣品及酶標(biao)試劑(ji)，其余各步操作(zuo)相(xiang)同）、標(biao)準(zhun)孔(kong)、待測樣品孔(kong)。在酶標(biao)包被板上標(biao)準(zhun)品準(zhun)確加樣50μl，待測樣(yang)品(pin)(pin)孔中先加樣(yang)品(pin)(pin)稀釋(shi)液40μl，然后再(zai)加待測樣(yang)品(pin)(pin)10μl（樣(yang)品(pin)(pin)最終稀釋(shi)度為5倍）。加樣(yang)將(jiang)樣(yang)品(pin)(pin)加于酶(mei)標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕(qing)輕(qing)晃(huang)動混勻。

3. 溫育：用(yong)封板膜封板后(hou)置37℃溫育30分(fen)鐘。   

4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用(yong)蒸餾水(shui)30倍稀釋后備用(yong)

5. 洗(xi)滌：小心揭掉(diao)封(feng)板膜(mo)，棄去液體，甩干，每孔加滿洗(xi)滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干(gan)。

6. 加酶：每孔(kong)加入(ru)酶標試(shi)劑50μl，空白孔除(chu)外。

7. 溫育：操(cao)作同3。

8. 洗滌：操作(zuo)同5。

9. 顯色：每孔先加(jia)入顯色劑A50μl，再(zai)加入顯色(se)劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色(se)10分鐘.

10. 終止(zhi)：每孔(kong)加終止(zhi)液50μl，終止反應(ying)（此時藍色立轉(zhuan)黃(huang)色）。

11. 測定(ding)：以空白(bai)孔調零，450nm波長(chang)依序(xu)測量各孔(kong)的吸光度（OD值）。 測定應在(zai)加終止液后15分鐘以內進行。

操(cao)作程序總(zong)結：

計算：

  以(yi)標(biao)準物(wu)的濃度為橫坐標(biao)，OD值為(wei)縱坐(zuo)標(biao)，在坐(zuo)標(biao)紙(zhi)上繪出(chu)標(biao)準曲(qu)線(xian)，根據樣(yang)(yang)品(pin)(pin)的OD值由(you)標(biao)準曲(qu)線(xian)查出(chu)相應的濃(nong)度；再乘(cheng)以稀(xi)釋倍(bei)數；或用標(biao)準物的濃(nong)度與(yu)OD值計(ji)算出(chu)標(biao)準曲(qu)線(xian)的直線(xian)回(hui)歸方(fang)程(cheng)(cheng)式，將樣(yang)(yang)品(pin)(pin)的OD值代入方(fang)程(cheng)(cheng)式，計(ji)算出(chu)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)濃(nong)度，再乘(cheng)以稀(xi)釋倍(bei)數，即為(wei)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)的實(shi)際濃(nong)度。

注(zhu)意事項：

1．試劑盒(he)從冷藏環境(jing)中取(qu)出(chu)應(ying)在室(shi)溫平衡15-30分鐘后(hou)方可(ke)使用(yong)，酶標(biao)包被板開封(feng)后(hou)如未用(yong)完，板條應(ying)裝入(ru)密封(feng)袋(dai)中保存(cun)。

2．濃洗(xi)滌液可(ke)能會(hui)有結晶析出，稀釋時可(ke)在(zai)水(shui)浴中加溫助溶(rong)，洗(xi)滌時不(bu)影響結果。

3．各步加樣(yang)均(jun)應使用(yong)加樣(yang)器，并(bing)經常校對(dui)其準確性，以(yi)避免(mian)試驗誤差。一次(ci)加樣(yang)時(shi)間最好(hao)控制在(zai)5分鐘內，如標本數量多(duo)，推薦使用(yong)排槍加樣(yang)。

4． 請(qing)每次測定(ding)的同(tong)時做標準曲(qu)線，最好(hao)做復孔(kong)。如標本(ben)中待測物(wu)質含量過高（樣(yang)本(ben)OD值(zhi)大于(yu)標準品孔第(di)一(yi)孔的OD值(zhi)），請先用樣(yang)品稀(xi)(xi)釋(shi)液稀(xi)(xi)釋(shi)一(yi)定倍數(shu)(shu)（n倍）后(hou)再測(ce)定，計算(suan)時請最(zui)后(hou)乘以總稀(xi)(xi)釋(shi)倍數(shu)(shu)（×n×5）。

5． 封板(ban)膜只限一次性使(shi)用，以(yi)避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴(yan)格按照說明書(shu)的操作進行，試驗結果判定必(bi)須(xu)以(yi)酶標儀(yi)讀數為準.

8．所有樣(yang)品，洗(xi)滌液和各種廢棄物都應按(an)傳染物處理。

9．本試劑不同批(pi)號組分不得混用。

保存(cun)條(tiao)件(jian)及有效期:
1．試劑盒保(bao)存：；2-8℃。
2．有效期：6 個月。