多聚(ju)ADP核糖聚(ju)合酶(mei)檢測試劑盒說明書 試劑盒組成 : 1、30倍(bei)濃(nong)縮洗(xi)滌(di)液(ye) 20ml×1瓶(ping) 7 終(zhong)止液(ye) 6ml×1瓶(ping) 2、酶標(biao)試劑 6ml×1瓶(ping) 8 標(biao)準品（160pg/ml） 0.5ml×1瓶(ping) 3、酶(mei)標包(bao)被板 12孔×8條 9 標準(zhun)品稀(xi)釋液(ye) 1.5ml×1瓶 4、樣(yang)品稀釋液 6ml×1瓶(ping) 10 說(shuo)明書 1份 5、顯色劑(ji)A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張(zhang) 6、顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個 實驗原理: 本(ben)試劑盒應用(yong)雙抗體(ti)(ti)(ti)(ti)夾心(xin)法測定標本(ben)中(zhong)血(xue)(xue)(xue)清(qing)(qing)(qing)(qing)(qing)素/血(xue)(xue)(xue)清(qing)(qing)(qing)(qing)(qing)胺(ST)水平。用(yong)純化的血(xue)(xue)(xue)清(qing)(qing)(qing)(qing)(qing)素/血(xue)(xue)(xue)清(qing)(qing)(qing)(qing)(qing)胺(ST)抗體(ti)(ti)(ti)(ti)包被(bei)微(wei)孔板(ban)，制成(cheng)固相抗體(ti)(ti)(ti)(ti)，往包被(bei)單抗的微(wei)孔中(zhong)依次加入血(xue)(xue)(xue)清(qing)(qing)(qing)(qing)(qing)素/血(xue)(xue)(xue)清(qing)(qing)(qing)(qing)(qing)胺(ST)，再與HRP標記的血(xue)(xue)(xue)清(qing)(qing)(qing)(qing)(qing)素/血(xue)(xue)(xue)清(qing)(qing)(qing)(qing)(qing)胺(ST)抗體(ti)(ti)(ti)(ti)結合，形成(cheng)抗體(ti)(ti)(ti)(ti)-抗原(yuan)-酶標抗體(ti)(ti)(ti)(ti)復(fu)合物(wu)，經過徹(che)di 洗滌(di)后加底(di)物(wu)TMB顯色(se)。TMB在(zai)HRP酶的催化下(xia)轉化成(cheng)藍色(se)，并在(zai)酸的作用(yong)下(xia)轉化成(cheng)最終的黃色(se)。顏色(se)的深淺和樣品中(zhong)的血(xue)(xue)(xue)清(qing)(qing)(qing)(qing)(qing)素/血(xue)(xue)(xue)清(qing)(qing)(qing)(qing)(qing)胺(ST)呈正相關。用(yong)酶標儀在(zai)450nm波長下(xia)測定吸光(guang)度(du)（OD值），通過標準曲線計(ji)算樣品中(zhong)血(xue)(xue)(xue)清(qing)(qing)(qing)(qing)(qing)素/血(xue)(xue)(xue)清(qing)(qing)(qing)(qing)(qing)胺(ST)濃度(du)。 試劑盒特點: 1、高效(xiao)、靈敏、特(te)異的抗體; 2、穩定的重復(fu)性(xing)和可靠性(xing); 3、吸附(fu)性能(neng)好(hao)，空(kong)白值低，孔底透明度高的固相(xiang)載體; 4、適(shi)用血(xue)清、血(xue)漿、組織勻漿液、細(xi)胞培養上(shang)清液、尿液等等多種標本類型; 5、節省實驗經費。 試劑盒性能： 1. 靈敏度(du)(du)：zui小的檢測(ce)濃(nong)度(du)(du)小于(yu)1號標準品(pin)。稀釋度(du)(du)的線(xian)性(xing)。樣品(pin)線(xian)性(xing)回歸與預期濃(nong)度(du)(du)相關系數R值(zhi)為0.990。 2. 特異性：不與(yu)其它細胞因子反應。 3. 重(zhong)復性(xing)：板(ban)(ban)內、板(ban)(ban)間變(bian)異系數均(jun)小于10%。 標本要求: 1．標本采集(ji)后盡早(zao)進(jin)(jin)行提(ti)取，提(ti)取按相關(guan)文(wen)獻進(jin)(jin)行，提(ti)取后應盡快進(jin)(jin)行實驗。若不能馬上進(jin)(jin)行試(shi)驗，可將標本放于-20℃保存(cun)，但應避免(mian)反復凍融 2．不(bu)能(neng)檢測含NaN3的(de)樣品，因(yin)NaN3抑制辣(la)根(gen)過氧化(hua)物酶(mei)的(de)（HRP）活性(xing)。 樣本處理及要求： 1.血清：全血標本請于(yu)室溫放置2小(xiao)時或4℃過夜后于(yu)1000g離心20分鐘(zhong)，取上清即(ji)可檢測，或將標本放于(yu)-20℃或-80℃保存(cun)，但(dan)應避免反復凍融。 2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗(kang)凝劑，標本采集后30分鐘內(nei)于(yu)2 - 8°C 1000g離心20分鐘，或將(jiang)標本放于(yu)-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍(dong)融。 3. 組(zu)織(zhi)(zhi)勻(yun)漿(jiang)(jiang)：用預(yu)冷的(de)PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組(zu)織(zhi)(zhi)，去除殘留血(xue)液(ye)(ye)（勻(yun)漿(jiang)(jiang)中(zhong)裂(lie)解的(de)紅細胞(bao)會影響測(ce)量結果），稱重后將(jiang)(jiang)組(zu)織(zhi)(zhi)剪(jian)碎。將(jiang)(jiang)剪(jian)碎的(de)組(zu)織(zhi)(zhi)與(yu)對應體積的(de)PBS（一(yi)般按1:9的(de)重量體積比，比如1g的(de)組(zu)織(zhi)(zhi)樣品(pin)對應9mL的(de)PBS，具體體積可根(gen)據(ju)實驗需(xu)要(yao)適當調整，并做好記(ji)錄。推薦在PBS中(zhong)加入蛋白酶抑制劑）加入玻(bo)璃(li)勻(yun)漿(jiang)(jiang)器中(zhong)，于冰上充分研磨(mo)。為了進一(yi)步裂(lie)解組(zu)織(zhi)(zhi)細胞(bao)，可以(yi)對勻(yun)漿(jiang)(jiang)液(ye)(ye)進行(xing)超聲破碎，或反復凍融。將(jiang)(jiang)勻(yun)漿(jiang)(jiang)液(ye)(ye)于5000×g離心5~10分鐘，取上清(qing)檢(jian)測(ce)。 4. 細胞培養物上清或(huo)其它生物標本(ben)：1000g離心20分(fen)鐘，取上清即可檢測，或(huo)將標本(ben)放于-20℃或(huo)-80℃保存，但應避免反復凍融。 操作步驟： 1.標準品(pin)的稀釋：本試劑(ji)盒(he)提供原倍標準品(pin)一支，用(yong)戶可(ke)按照下列圖(tu)表在小試管中進行稀釋。  2.加(jia)(jia)樣(yang)：分別(bie)設空白(bai)孔(kong)(kong)(kong)（空白(bai)對照孔(kong)(kong)(kong)不加(jia)(jia)樣(yang)品及(ji)酶標(biao)試劑，其余(yu)各步操作(zuo)相同(tong)）、標(biao)準(zhun)孔(kong)(kong)(kong)、待(dai)測樣(yang)品孔(kong)(kong)(kong)。在(zai)酶標(biao)包被板上(shang)標(biao)準(zhun)品準(zhun)確加(jia)(jia)樣(yang)50μl，待(dai)測樣(yang)品孔(kong)(kong)(kong)中(zhong)先加(jia)(jia)樣(yang)品稀(xi)釋液40μl，然后(hou)再加(jia)(jia)待(dai)測樣(yang)品10μl（樣(yang)品最終稀(xi)釋度(du)為5倍）。加(jia)(jia)樣(yang)將樣(yang)品加(jia)(jia)于(yu)酶標(biao)板孔(kong)(kong)(kong)底部，盡量不觸及(ji)孔(kong)(kong)(kong)壁，輕(qing)輕(qing)晃動混勻。 3.溫育：用封板(ban)膜封板(ban)后置(zhi)37℃溫育30分鐘(zhong)。 4.配(pei)液：將30倍(bei)濃縮洗滌液用(yong)(yong)蒸餾水30倍(bei)稀釋后備用(yong)(yong) 5.洗滌(di)：小心揭掉封(feng)板膜，棄去(qu)液體，甩(shuai)干，每孔加滿洗滌(di)液，靜置30秒后棄去(qu)，如此重(zhong)復5次，拍(pai)干。 6.加(jia)酶：每(mei)孔加(jia)入酶標試(shi)劑50μl，空(kong)白孔除外。 7.溫育：操(cao)作同3。 8.洗滌：操作同(tong)5。 9.顯色(se)：每孔先加入顯色(se)劑A50μl，再加入顯色(se)劑B50μl，輕輕震(zhen)蕩混勻，37℃避光(guang)顯色(se)10分(fen)鐘. 10.終(zhong)止：每孔加終(zhong)止液(ye)50μl，終(zhong)止反應（此時藍色立轉黃色）。 11.測(ce)定：以空白孔(kong)調(diao)零(ling)，450nm波長依序測(ce)量各孔(kong)的吸光度（OD值）。 測(ce)定應在加(jia)終(zhong)止(zhi)液(ye)后15分鐘(zhong)以內進行。 計算： 以(yi)標(biao)準(zhun)物的濃(nong)度(du)為(wei)橫(heng)坐(zuo)標(biao)，OD值(zhi)為(wei)縱坐(zuo)標(biao)，在坐(zuo)標(biao)紙上繪出(chu)標(biao)準(zhun)曲(qu)(qu)線，根(gen)據樣(yang)品的OD值(zhi)由標(biao)準(zhun)曲(qu)(qu)線查(cha)出(chu)相(xiang)應的濃(nong)度(du)；再乘以(yi)稀釋倍(bei)數；或用標(biao)準(zhun)物的濃(nong)度(du)與OD值(zhi)計算出(chu)標(biao)準(zhun)曲(qu)(qu)線的直線回(hui)歸(gui)方(fang)程式(shi)，將樣(yang)品的OD值(zhi)代入方(fang)程式(shi)，計算出(chu)樣(yang)品濃(nong)度(du)，再乘以(yi)稀釋倍(bei)數，即為(wei)樣(yang)品的實際(ji)濃(nong)度(du)。 注意事項： 1．試劑盒從冷(leng)藏(zang)環境中取出應在(zai)室溫平衡15-30分(fen)鐘后方可使用(yong)，酶標包被板開封(feng)后如未(wei)用(yong)完(wan)，板條應裝(zhuang)入密(mi)封(feng)袋中保存。 2．濃洗滌(di)液可能(neng)會有結(jie)晶(jing)析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶(rong)，洗滌(di)時不影響結(jie)果(guo)。 3．各步加(jia)(jia)樣(yang)均應使(shi)用加(jia)(jia)樣(yang)器(qi)，并經(jing)常(chang)校對其準確(que)性，以避免試(shi)驗誤差。一次(ci)加(jia)(jia)樣(yang)時間最(zui)好控制在(zai)5分鐘內，如標本數(shu)量多，推薦使(shi)用排槍加(jia)(jia)樣(yang)。 4．請(qing)每次測(ce)定(ding)的同時做(zuo)標準(zhun)曲(qu)線(xian)，最好做(zuo)復孔。如標本(ben)中待測(ce)物質含量過高（樣本(ben)OD值大于標準(zhun)品(pin)孔第一(yi)(yi)孔的OD值），請(qing)先用(yong)樣品(pin)稀釋(shi)液稀釋(shi)一(yi)(yi)定(ding)倍數（n倍）后(hou)再測(ce)定(ding)，計算時請(qing)最后(hou)乘以總稀釋(shi)倍數（×n×5）。 5．封板膜只限(xian)一次(ci)性使用，以避免交(jiao)叉污染(ran)。 6．底物請避(bi)光保存。 7．嚴格按照說(shuo)明書的操作(zuo)進行，試驗結果判(pan)定必須(xu)以酶標儀(yi)讀數為準. 8．所有(you)樣品(pin)，洗滌液和各種(zhong)廢棄(qi)物都應(ying)按(an)傳染物處理。 9．本試劑不同(tong)批(pi)號組分不得混用(yong)。 保存條件及有效期:
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 個月。
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